Сравнение наборов реагентов четырех фирм-производителей

19.06.200379760

М. Е. Урусова*1, В. А. Головаченко1, Е. П. Гитель2, В. Г. Колодько3, Н. Д. Фанченко3, Д. Г. Полынцев1.


СРАВНЕНИЕ НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ ЧЕТЫРЕХ ФИРМ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ ПО КАЧЕСТВУ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНАЛИТОВ И ОТНОСИТЕЛЬНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ 




  1. Лаборатория инфекционной диагностики, Лаборатория гормональной диагностики, ЗАО «Алкор Био» , Санкт-Петербург.


  2. Отдел гормональных исследований, Клиника акушерства игинекологии ММА им. И. М. Сеченова, Москва.


  3. Лаборатория эндокринологии, Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, Москва.

*Автор для переписки: Урусова Мария Евгеньевна, 197110, С-Петербург, а/я 243; тел. (812) 596-6775, факс (812) 596-6780, E-mail: maha7@MU9947.spb.edu или alkorbio@peterlink.ru


Ключевые слова: иммуноферментный анализ, наборы реагентов, диагностическая ценность, информативность, надежность.


В предыдущей работе мы сравнили значения концентрации 11 аналитов, измеренные в сыворотке крови с помощью коммерчески доступных наборов реагентов четырех фирм-производителей: Алкор Био, Roche, Bayer Corporation и Diagnostic Products Corporation (DPC), для определения их согласованности, информативности и надежности. Было показано, что в целом результаты, полученные с использованием наборов реагентов фирмы Алкор Био, совпадают с результатами, полученными с использованием наборов реагентов трех остальных фирм.

Цель данной работы состояла в сравнении наборов реагентов вышеперечисленных фирм по их диагностической ценности при определении тех же аналитов: кортизола, прогестерона, тестостерона, трийодтиронина, тироксина, хорионического гонадотропина (ХГч), пролактина, альфа-фетопротеина, лютеинизирующего (ЛГ), фолликулостимулирующего (ФСГ) и тиреотропного (ТТГ) гормонов.

Были обнаружены большие проценты совпадения условных диагнозов, полученных при использовании наборов реагентов фирм Алкор Био и Roche, Алкор Био и Bayer и Алкор Био и DPC.


M. E. Urusova*1, V. A. Golovachenko1, E. P. Gitel2, V. G. Kolodko3,  N. D. Fanchenko3, D. G. Polyntsev1.


COMPARISON OF REAGENTS SETS OF FOUR MANUFACTURERS ON QUALITY OF DEFINITION AND RELATIVE DIAGNOSTIC VALUE




  1. Laboratory of infectious diagnostics, Laboratory of hormonal diagnostics, Alkor Bio, Ltd, Saint Petersburg.


  2. Department of hormonal researches, M. I. Setchenov Clinic of obstetrics and gynecology, Moscow.


  3. Endocrynology laboratory, the Centre of science of obstetrics, gynecology and perinatology, Russian Academy of Medical Science, Moscow.

     *The author for correspondence: Maria Urusova, 197110, St. Petersburg, P.O. box 243; ph. (812) 596-6775, fax (812) 596-6780, E-mail: maha7@MU9947.spb.edu or alkorbio@peterlink.ru


In the previous work we have compared values of concentration 11 diagnostic kits, measured in a serum by commercially accessible sets of reagents of four manufacturers: Alkor Bio, Roche, Bayer Corporation and Diagnostic Products Corporation (DPC), for definition of their coordination, information ability and reliability. It has been shown, that as a whole the results received with use of sets of reagents of Alkor Bio, coincide with the results received with use of sets of reagents of three other firms.

The purpose of the given work has consisted in comparison of reagents sets of above firms on their diagnostic value. The big percent of concurrence of the conditional diagnoses received at use of reagents sets of Alkor Bio and Roche, Alkor Bio and Bayer and Alkor Bio and DPC have been found out. Distinctions on concurrence of diagnoses between the given pairs sets are doubtful.


Введение


Метод иммуноферментного анализа [9] широко используется для клинического определения разнообразных антигенов и антител в сыворотке крови человека. Этот метод характеризуется скоростью и простотой в исполнении процедур по сравнению с такими методами как иммуноблоттинг и иммунофлуоресценция in situ, высокой чувствительностью и специфичностью; в отличие от методов радиоиммунологического анализа, в данном методе не применяются опасные для здоровья реактивы.

В настоящее время на мировом рынке существует большое количество наборов реагентов от разных фирм-производителей для иммуноферментного определения различных аналитов (гормонов, опухолевых маркеров и пр.), различающихся по специфичности антител, используемым для мечения ферментам, субстратам и хромогенам.

В предыдущей работе [10] мы сравнили значения концентрации 11 аналитов, измеренные в сыворотке крови с помощью коммерчески доступных наборов реагентов четырех фирм-производителей: Алкор Био, Roche, Bayer Corporation и Diagnostic Products Corporation (DPC), для определения их согласованности, информативности и надежности. Было показано, что в целом результаты, полученные с использованием наборов реагентов фирмы Алкор Био, совпадают с результатами, полученными с использованием наборов реагентов трех остальных фирм.

Цель данной работы состояла в сравнении наборов реагентов вышеперечисленных фирм по их диагностической ценности при определении тех же аналитов: кортизола, прогестерона, тестостерона, трийодтиронина, тироксина, хорионического гонадотропина (ХГч), пролактина, альфа-фетопротеина, лютеинизирующего (ЛГ), фолликулостимулирующего (ФСГ) и тиреотропного (ТТГ) гормонов.

Сравнение проводили по следующим параметрам:




  • совпадение условных диагнозов;


  • коэффициент корреляции между значениями при парном сравнении наборов реагентов;


  • регрессионный анализ.

Были обнаружены большие проценты совпадения условных диагнозов, полученных при использовании наборов реагентов фирм Алкор Био и Roche, Алкор Био и Bayer и Алкор Био и DPC. Различия по совпадению диагнозов между данными парами наборов недостоверны. Кроме того, было обнаружено, что практически все коэффициенты линейной корреляции между значениями, полученными с помощью попарно сравниваемых наборов, превышают 0,9. На основании этих данных были сделаны выводы об одинаковой диагностической ценности, информативности и надежности наборов реагентов четырех фирм-производителей: Алкор Био, Roche, Bayer Corporation и DPC.


Материалы и методы


Образцы сыворотки крови

Образцы сыворотки крови собирали в отделе гормональных исследований (далее – ОГИ) Клиники акушерства и гинекологии ММА им. И. М. Сеченова и в лаборатории эндокринологии (далее – ЛЭ) Научного Центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН у пациентов, проходивших обследование в этих лабораториях. В образцах измеряли значения вышеуказанных аналитов наборами реагентов фирм Roche, Bayer Corporation и DP (табл. 1).


Таблица 1 Наборы реагентов и аналиты, исследованные в разных лабораториях





















Лаборатория


Название анализатора и аналиты


Bayer ACS:180


Roche Cobas Core


DPC Immulite

ЛЭ ТТГ, тироксин, трийод-тиронин, ХГч, ЛГ, ФСГ, альфа-фетопротеин, пролактин кортизол,

прогестерон, тестостерон
ОГИ прогестерон,

тестостерон,

ХГч, ЛГ, ФСГ
кортизол, альфа-фетопротеин

Затем в клинико-диагностическом центре (далее – КДЦ) ЗАО Алкор Био повторно измеряли концентрацию аналитов в тех же образцах с помощью наборов реагентов фирмы Алкор Био. В качестве контроля мы использовали 3 коммерческие контрольные сыворотки Lyphochek® Immunoassay Plus Control (Cat. № 370, Lot № 40100) производства Bio-Rad Laboratories (США), приготовленные на основе сыворотки крови человека с добавлением компонентов человеческого происхождения, чистых химических реактивов и терапевтических препаратов [6].


Определение аналитов

Использованные в работе наборы реагентов представлены в табл. 2. Все процедуры проводились согласно инструкциям, прилагаемым к наборам [2–5]. 


Таблица 2. Использованные в работе наборы реагентов




































































































Производитель


Набор реагентов


Кат №

Roche «Cobas Core TSH 3rd gen.II EIA» 2147777
«Cobas Core T3 EIA» 2051907
«Cobas Core T4 EIA» 2051877
«Cobas Core LH EIA» 2055333
«Cobas Core FSH EIA» 2051940
«Cobas Core Prolactin EIA» 2051958
«Cobas Core Progesterone EIA» 2055031
«Cobas Core β-HCG EIA» 2054647
«Cobas Core AFP EIA» 2051389
Bayer Corporation «Progesterone +E» 118529
«Testosterone +E» 672324
«Total hCG +B» 672310
«LH2 +B» 106085
«FSH +B» 672243
DPC «Progesterone kit» LKPG 5
«Total testosterone kit» LKTT 5
«Cortisol kit» LKCO 5
«AFP kit» LKAP5
Алкор Био «СтероидИФА-кортизол» 100-01
«СтероидИФА-прогестерон» 100-02
«СтероидИФА-тестостерон» 100-03
«ИФА-пролактин» 100-04
«ГонадотропинИФА-ЛГ» 100-05
«ГонадотропинИФА-ФСГ» 100-06
«ГонадотропинИФА-ХГч» 100-07
«ТироидИФА-трийодтиронин» 100-08
«ТироидИФА-тироксин» 100-09
«ТироидИФА-ТТГ» 100-11
«ИФА-АФП» 100-12

В наборах реагентов для автоматического анализатора Roche Cobas Core также применяются полистироловые шарики в качестве твердой фазы для иммуноферментного анализа, фермент – пероксидаза хрена и хромоген – 3,3′,5,5′,-тетраметилбензидин (ТМБ) [5].

Наборы реагентов в системе автоматического анализатора Bayer ACS:180 используют принцип прямой хемилюминесценции с магнитными частицами в качестве твердой фазы и акридиновым эфиром в качестве хемилюминесцентной метки [3].

Наборы реагентов в системе автоматического анализатора DPC Immulite® основаны на иммуноферментном анализе с использованием полистироловых шариков в качестве твердой фазы, щелочной фосфатазы в качестве фермента и хемилюминесцентного субстрата [4].

Наборы реагентов Алкор Био предназначены для проведения анализа вручную и основаны на принципе иммуноферментного анализа с 96-луночными разборными микротитровальными планшетами в качестве твердой фазы, пероксидазой хрена в качестве фермента и ТМБ в качестве хромогена [2].


Методы статистического анализа

Для оценки зависимости между данными, полученными попарно с использованием наборов реагентов фирм Алкор Био и Roche, Алкор Био и Bayer Corporation и Алкор Био и DPC, применялся коэффициент линейной корреляции Пирсона (r) [1, 7, 8]. Для определения характера этой зависимости мы использовали линейный регрессионный анализ по методу наименьших квадратов [1,7,8]. В результате мы получали уравнения линейной регрессии, имеющие вид:


y = kx = b, где:



y – значение, измеренное набором реагентов фирмы Алкор Био;

k – коэффициент регрессии;

x – значение, полученное набором, с которым производилось сравнение;

b – константа.


В случае низкой корреляции, когда проведение регрессионного анализа представлялось невозможным, мы использовали «средний процент открытия», который рассчитывали по формуле:


, где:



ПО – средний процент открытия;

[АБ] – концентрация аналита в сыворотке, измеренная набором Алкор Био;

[НС] – концентрация аналита в этой же сыворотке, измеренная с помощью того набора реагентов, с которым производится сравнение (табл. 1, 2);

N – общее количество сывороток.


Для дальнейшей сравнительной оценки качества наборов реагентов мы использовали «процент сывороток, совпадающих по условному диагнозу». Условный диагноз – это статус образца в терминах «норма», «выше нормы» или «ниже нормы». Он ставился без привлечения каких-либо клинических данных. Это означает, что каждой сыворотке был присвоен условный диагноз относительно границ нормальных значений, предложенных в инструкции для соответствующего набора реагентов.

Затем для каждой пары сравниваемых наборов реагентов вычислялось количество сывороток с несовпадающим условным диагнозом. Дальнейший расчет процента сывороток, совпадающих по условному диагнозу, осуществлялся по формуле: 

 , где:



СД – процент сывороток, совпадающих по условному диагнозу;

n – количество сывороток, не совпадающих по условному диагнозу, определенному двумя исследуемыми наборами реагентов;

N – общее количество сывороток.


Достоверность различий коэффициентов корреляции определяли по t-критерию Стьюдента после z-преобразования (при P=95%): 




 , где r – коэффициент линейной корреляции Пирсона.


Достоверность различия процентов сывороток (при P=95%), совпадающих по условному диагнозу, определяли по методу Фишера после преобразования долей в радианы по формуле:


φ , где p – доля сывороток, совпадающих по диагнозу.


Результаты


Результаты определения концентраций различных аналитов в контрольных сыворотках фирмы Bio-Rad Laboratories с помощью исследуемых наборов реагентов представлены в табл. 3.

Таблица 3. Концентрации аналитов в сыворотках фирмы Bio-Rad Laboratories,

измеренные с помощью рассматриваемых наборов реагентов















































































































































































Аналит


Производитель


 Единицы измерения


Контрольные сыворотки


№1


№2


№3


        среднее значение (доверительный интервал)     

трийодтиронин Roche нмоль/л 1.06 (0.72-1.40) 3.0 (2.4-3.7) 5.1 (3.8-6.4)
Алкор Био нмоль/л 0.9 (0.7-1.1) 4.8 (4.6-5.1) 9.3 (9.0-9.7)
тироксин Roche нмоль/л 55 (42-69) 99 (74-124) 217 (169-264)
Алкор Био нмоль/л 48 (46-50) 95 (91-99) 218 (203-233)
прогестерон Bayer нмоль/л 4.2 (3.3-5.0) 24 (19-28) 58 (47-70)
DPC нмоль/л 2.1 (<0.6-3.7) 29 (22-35) 79 (61-95)
Алкор Био нмоль/л 0.04 (0-0.11) 29 (27-31) 78 (75-81)
тестостерон Bayer нмоль/л 2.5 (2.0-3.0) 22 (17-26) 44 (35->52)
Алкор Био нмоль/л 0.8 (0.6-1.0) 20 (19-21) 43 (42-45)
хорионический

гонадотропин
Roche мМЕ/мл 5.2 (3.6-6.7) 21 (16-25) 149 (119-179)
Bayer мМЕ/мл 7.4 (6.0-8.9) 28 (23-34) 182 (145-218)
Алкор Био мМЕ/мл 10.1 (9.4-10.8) 37 (36-38) 235 (223-248)
Пролактин Roche мМЕ/л 250 (200-300) 506 (405-607) 1582 (1265-1898)
Алкор Био мМЕ/л 328 (315-340) 614 (585-643) 1646 (1554-1738)
альфа-фетопротеин DPC МЕ/мл 17 (14-20) 79 (69-89) 164 (145-182)
Roche МЕ/мл 17 (13-21) 89 (72-107) (155->200)
Алкор Био МЕ/мл 18 (18-19) 87 (84-90) 178 (171-186)
лютеинизирующий гормон Roche мМЕ/мл 1.3 (0.8-1.7) 16 (13-19) 51 (41-62)
Bayer мМЕ/мл 1.8 (1.4-2.1) 19 (15-23) 59 (47-71)
Алкор Био мМЕ/мл 1.6 (1.5-1.8) 17 (16-17) 49 (47-51)
фолликуло-

стимулирующий

гормон
Roche мМЕ/мл 7.7 (5.6-9.8) 20 (16-24) 61 (49-73)
Bayer мМЕ/мл 6.4 (5.1-7.6) 19 (15-23) 64 (51-77)
Алкор Био мМЕ/мл 7.7 (7.4-7.9) 20 (20-21) 57 (55-59)
тиреотропный

гормон
Roche мМЕ/л 0.44 (0.31-0.58) (4.7->5.0) (>5.0)
Алкор Био мМЕ/л 0.3 (0.3-0.4) 4.3 (4.1-4.6) 27 (25-29)

Данные для наборов реагентов фирмы Алкор Био приводятся по результатам измерений, проведенных в лабораториях фирмы. Данные для наборов реагентов остальных фирм-производителей взяты из инструкции к контрольным сывороткам Lyphochek® Immunoassay Plus Control (Cat. № 370, Lot № 40100) [6]. Число, выделенное курсивом – среднее значение, в скобках – доверительный интервал.

Практически во всех случаях средние значения концентрации аналитов, измеренные наборами фирмы Алкор Био, совпадают со средними значениями, установленными для наборов, с которыми производится сравнение; то же можно отметить и для интервалов нормальных значений. Исключение составляют три случая:




  1. Концентрации трийодтиронина в контрольной сыворотке №3 при измерении набором Алкор Био достоверно выше значений, установленных с помощью набора фирмы Roche. Уровни трийодтиронина в контрольной сыворотке №3 выше нормального уровня этого аналита в сыворотке крови здоровых людей. В нашем распоряжении была выборка сывороток крови пациентов только со значениями, близкими к нормальным, поэтому подобное отличие для нашего анализа не особого значения имеет.


  2. Концентрации прогестерона и тестостерона в контрольной сыворотке №1, измеренные наборами фирмы Алкор Био, достоверно ниже значений, установленных с помощью наборов фирмы Bayer Corporation. Однако и в этом случае все значения попадают в интервал нормальных, определенных для наборов реагентов обеих фирм, поэтому данный факт не влияет на качество определения условного диагноза.


  3. Уровни хорионического гонадотропина в контрольной сыворотке №2, измеренные набором фирмы Алкор Био, достоверно выше установленных с помощью наборов фирмы Roche. Возможные причины такого несоответствия могут объясняться матрикс-эффектом (см. «Обсуждение»).

Интервалы нормальных значений концентраций исследованных аналитов для каждого набора реагентов и проценты сывороток, совпадающих по условному диагнозу при определении наборами реагентов фирмы Алкор Био и трех сравниваемых с ней фирм, представлены в табл. 4.


Таблица 4 Нормальные значения концентраций аналитов и совпадение условных диагнозов
































































































































































































































































Аналит


Единици измерения


Группа


Алкор Био


DPC


Roche


Bayer


интервал


интервал


СД


интервал


СД


интервал


СД

Кортизол нмоль/л 150-660 138-680 96,7%
119-618 92,0%
Т3 нмоль/л 1-2,8 1,22-3,07 84,0%
Т4 нмоль/л 54-156 64-144,6 84,6%
Прогестерон нмоль/л м <6 0,32-1,9 72,6% 0,89-3,88 80,3%
ж/ф <6 0,64-9,9 94,5% 0,48-4,45 89,0%
ж/л 10-89 0,96-64,6 79,5% 10,6-89,1 94,5%
Тестостерон нмоль/л м 12,1-38,3 8,4-28,7 98,5%
ж <4,3 0,5-2,64 86,4%
ХГч мМЕ/мл <10 <10 99,3% <20 98,0%
Пролактин мМЕ/мл м 105-540 58-475 90,7%
ж 67-726 61-512 93,1%
АФП МЕ/мл <14,4 <6,72 97,9% 98,5%
ЛГ мМЕ/мл м 0,8-8,4 0,5-10 92,0% 1,5-9,3 91,5%
ж/ф 1,1-8,7 0,5-18 84,3% 1,9-12,5 91,0%
ж/оп 13-72 14-80 96,7%
ж/л 0,9-14,4 0,5-18 94,7% 0,5-16,9 96,8%
ж/пм 19-72 10-70 92,0% 15,9-54,0 93,8%
ФСГ мМЕ/мл м 1,0-11,8 0,8-13,0 96,0% 1,4-18,1 90,6%
ж/ф 1,8-11,3 3-12 93,2% 2,5-10,2 87,9%
ж/оп 4,9-20,4 6-25 91,2%
ж/л 1,1-9,5 2-12 95,5% 1,5-9,1 91,2%
ж/пм 31,0-130 30-120 95,5% 23,0-116,3 99,1%
ТТГ мМЕ/мл 0,23-3,4 0,32-3,73 91,0%

В табл. 4 в графе «интервал» указаны границы нормальных значений соответствующего аналита для набора реагентов той или иной фирмы-производителя, в графе «СД» – процент совпадения условных диагнозов между значениями, измеренными набором реагентов фирмы Алкор Био и сравниваемым набором реагентов. В графе «группа» обозначены группы сывороток из общей выборки по следующим характеристикам: м – мужские, ж/ф – женские в фолликулиновой фазе менструального цикла, ж/оп – женские в фазе овуляторного пика, ж/л – женские в лютеиновой фазе цикла, ж/пм – женские в период постменопаузы. Темным цветом выделены проценты сывороток, совпадающих по условному диагнозу в тех случаях, когда только малая часть выборки входила в рассматриваемый условный диагноз; эти значения процентов требуют дополнительного подтверждения.


Результаты корреляционного и регрессионного анализа представлены в табл. 5. В тех случаях, где обнаруживалась ярко выраженная линейная зависимость между данными (коэффициент линейной корреляции >0,9), мы определяли уравнение линейной регрессии по методу наименьших квадратов.


Таблица 5. Результаты регрессионного анализа



























































































































































































































Аналит


Алкор Био/Bayer


Алкор Био/DPC


Алкор Био/Roche


r


N


У.Л.Р.


ПО


r


N


У.Л.Р.


ПО


r


N


У.Л.Р.


ПО

Кортизол ОГИ 0,919 299 y=0,95х+58 113%
ЛЭ 0,972 122 y=0,970+22,2 122%
Трийодтиронин 0,529 106 95%
Тироксин 0,774 117 96%
Прогестерон 0,968 629 y=0,76+5,37 93% 0,986 73 y=0,88+2,45 91% 91%
Тестостерон 0,917 721 y=0,99-0,18 87%
да 5 нмоль/л 0,491 689 176%
хорионический гонадотропин 0,991 497 y=0,82+1843 99% 0,983 442 y=0,72+996 90%
до 500 мМЕ/мл 0,989 113 y=0,92+1,66 151% 0,968 200 y=0,96+2,51 105%
Пролактин 0,932 407 y=0,96+96 129%
альфа-фетопротеин 0,978 375 y=0,95+3,76 102% 0,958 131 y=0,86+5,13 98%
лютеинизирующий гормон 0,974 726 y=0,76+0,63 90% 0,989 300 y=1,16-0,24 119%
фолликулостимулирующий гормон 0,980 746 y=1,11+0,85 129% 0,990 353 y=0,78+0,59 85%
тиреотропный гормон 0,986 188 y=0,82+0,04 87%

Обозначения: r – коэффициент линейной корреляции Пирсона, N – количество сывороток в выборке, У.Л.Р. – уравнение линейной регрессии, ПО – средний процент открытия.


Определение кортизола

Концентрация кортизола в сыворотках крови определялась наборами реагентов фирмы Алкор Био и DPC (в ОГИ и ЛЭ). Проценты совпадений условных диагнозов в обоих случаях высокие (табл. 4). Это говорит о том, что диагноз, который может быть поставлен с учетом результатов анализов с помощью наборов реагентов фирм Алкор Био и DPC, совпадает. Коэффициенты корреляции между значениями, полученными с помощью наборов реагентов этих двух фирм, высокие (табл. 5). В уравнениях линейной регрессии регрессионный коэффициент стремится к 1, а константа немного выше уровня чувствительности (минимальное количество кортизола, определяемое набором Алкор Био, составляет 10 нмоль/л).


Определение трийодтиронина и тироксина.

Концентрация трийодтиронина в образцах измерялась наборами реагентов фирм Алкор Био и Roche. Представленные в табл. 4 данные свидетельствуют о довольно высоком проценте совпадений условных диагнозов. В нашем распоряжении были только сыворотки со значениями, группирующимися вокруг нормальных уровней трийодтиронина, и поэтому коэффициент корреляции между этими значениями недостаточен для проведения линейного регрессионного анализа. Низкое значение коэффициента линейной корреляции не позволяет проводить линейный регрессионный анализ, поэтому при сравнении данных, полученных с помощью наборов реагентов Алкор Био и Roche, мы использовали средний процент открытия (табл. 5). Значение среднего процента открытия высокое (95%).

Концентрация тироксина в образцах измерялась наборами реагентов фирм Алкор Био и Roche. Представленные в табл. 4 данные также свидетельствуют об удовлетворительном проценте совпадений условных диагнозов. Коэффициент корреляции между значениями, полученными с помощью сравниваемых наборов реагентов (табл. 5), достоверно выше, чем в проведенной ранее работе [10]. Однако, как и в случае с трийодтиронином, он недостаточен для проведения регрессионного анализа из-за характеристик выборки, поэтому при сравнении данных, полученных с помощью наборов реагентов двух фирм (Алкор Био и Roche) мы использовали средний процент открытия. Его значение также оказалось высоким (95%).


Определение прогестерона и тестостерона.

Концентрация прогестерона определялась наборами реагентов фирм Алкор Био, DPC и Bayer. Процент совпадений условных диагнозов удовлетворительный в обеих сравниваемых парах наборов реагентов (табл. 4). В паре наборов Алкор Био и Bayer он достоверно различается только при определении уровней прогестерона, характерных для женщин в лютеиновой фазе менструального цикла. Коэффициенты корреляции между значениями, полученными попарно наборами Алкор Био и Bayer и Алкор Био и DPC, высокие. Уравнения линейной регрессии (табл. 5) характеризуются удовлетворительным регрессионным коэффициентом (немного ниже 1) и увеличенной константой – выше уровня чувствительности наборов фирмы Алкор Био, который составляет 0,7 нмоль/л.

Концентрация тестостерона определялась наборами реагентов фирм Алкор Био и Bayer. Процент совпадений условных диагнозов в интервале нормальных значений для женщин удовлетворительный, для мужчин – очень высокий (табл. 4). Коэффициент корреляции между значениями, полученными сравниваемыми наборами реагентов, в целой выборке высокий, но значительно ниже в группе сывороток с низкими значениями (табл. 5). Уравнение линейной регрессии характеризуется регрессионным коэффициентом, который стремится к 1, и константой ниже уровня чувствительности наборов реагентов Алкор Био, который составляет 0,4 нмоль/л.


Определение хорионического гонадотропина (ХГч), пролактина и альфа-фетопротеина (АФП).

Концентрация ХГч в сыворотках крови определялась наборами реагентов фирм Алкор Био, Roche и Bayer. Процент совпадений условных диагнозов в данном случае очень высокий – 99,3% и 98,0% (табл. 4). Коэффициенты корреляции между значениями, полученными сравниваемыми наборами, достаточно высоки (табл. 5). Регрессионный коэффициент в обоих уравнениях стремится к 1. Константа при проведении анализа в группе сывороток, измеряемых без разведения, ниже уровня чувствительности наборов Алкор Био, который составляет 5 мМЕ/мл.

Концентрация пролактина определялась наборами реагентов фирм Алкор Био и Roche. Процент совпадений условных диагнозов очень высокий (табл. 4). Коэффициент корреляции также достаточно высок (табл. 5), уравнение линейной регрессии характеризуется близким к 1 регрессионным коэффициентом и относительно низкой константой.

Концентрация АФП в сыворотках крови определялась наборами реагентов фирм Алкор Био, Roche и Bayer. Процент совпадений условных диагнозов очень высокий – 97,9% и 98,5% (табл. 4). Коэффициенты корреляции между значениями, полученными с помощью сравниваемых наборов, сходны и достаточно высоки (табл. 5). Оба уравнения линейной регрессии имеют близкие к 1 регрессионные коэффициенты и константы меньше (или чуть больше) уровня чувствительности наборов фирмы Алкор Био, который составляет 5 МЕ/мл.


Определение лютеинизирующего (ЛГ), фолликулостимулирующего (ФСГ) и тиреотропного (ТТГ) гормонов.

Концентрация ЛГ в сыворотках крови определялась наборами реагентов фирм Алкор Био, Roche и Bayer. Большой процент совпадений условных диагнозов наблюдается в обеих парах наборов (табл. 4). В паре Алкор Био – Bayer он достоверно выше только при определении уровней лютеинизирующего гормона, характерных для женщин в фолликулиновой фазе менструального цикла. Коэффициенты корреляции между значениями, полученными сравниваемыми попарно наборами реагентов, достаточно высоки (табл. 5). Уравнение линейной регрессии при сравнении наборов фирм Алкор Био и Bayer имеет следующие характеристики: регрессионный коэффициент немного ниже 1, константа слегка выше уровня чувствительности набора Алкор Био. При сравнении наборов Алкор Био и Roche регрессионный коэффициент немного выше 1, абсолютное значение константы ниже уровня чувствительности набора Алкор Био, который составляет 0,5 мМЕ/мл.

Концентрация ФСГ в сыворотках крови определялась наборами реагентов фирм Алкор Био, Roche и Bayer. Большой процент совпадений условных диагнозов наблюдался при сравнении значений, полученных наборами Алкор Био и Roche. При сравнении значений, полученных наборами Алкор Био и Bayer, во всех интервалах нормы процент совпадений достоверно меньше (табл. 4). Коэффициенты корреляции между значениями, полученными с помощью сравниваемых попарно наборов, сходны и достаточно высоки (табл. 5). Уравнение линейной регрессии при сравнении наборов фирм Алкор Био и Bayer имеет следующие характеристики: коэффициент регрессии немного выше 1, константа немного выше уровня чувствительности набора Алкор Био. При сравнении наборов фирм Алкор Био и Roche коэффициент регрессии немного ниже 1, константа чуть выше уровня чувствительности набора Алкор Био (0,5 мМЕ/мл).

Концентрация ТТГ определялась наборами реагентов фирм Алкор Био и Roche. При сравнении полученных значений наблюдался большой процент совпадений условных диагнозов (табл. 4). Коэффициент корреляции достаточно высокий (табл. 5). Уравнение линейной регрессии характеризуется удовлетворительным регрессионным коэффициентом и константой ниже уровня чувствительности набора Алкор Био, который составляет 0,1 мМЕ/л.


Обсуждение


Из табл. 5 видно, что существует хорошая корреляция между значениями различных аналитов при измерении их с помощью наборов реагентов фирмы Алкор Био попарно с наборами фирм Roche, Bayer и DPC. Исключение составляет определение тироксина и трийодтиронина: коэффициенты корреляции в этих случаях недостаточно высоки для вывода о линейной зависимости между значениями, определяемыми с помощью наборов реагентов фирмы Алкор Био и Roche. Это объясняется тем, что концентрация указанных аналитов в исследованных сыворотках крови пациентов изменялась в узком диапазоне нормальных значений. Для проведения полноценного сравнительного анализа результатов измерения концентраций тироксина и трийодтиронина разными наборами реагентов необходимо обследовать достаточную по объему выборку пациентов с нарушениями функции щитовидной железы. Большое количество сывороток с низкими и высокими концентрациями этих аналитов позволит объективно определить как коэффициент корреляции, так и процент совпадающих по условному диагнозу сывороток.

При определении тестостерона, прогестерона, трийодтиронина и хорионического гонадотропина обнаруживаются разногласия результатов регрессионного анализа или значения средних процентов открытия при низкой корреляции (табл. 5) и измерения аналитов в контрольных сыворотках фирмы Bio-Rad Laboratories (табл. 3).

Концентрация трийодтиронина в контроле №3, измеренная набором фирмы Алкор Био, достоверно выше установленной с помощью набора фирмы Roche (табл. 3). Однако вся исследованная выборка сывороток крови пациентов имеет значения трийодтиронина в основном от 1 до 3 нмоль/л, что соответствует уровню этого гормона в контрольных сыворотках №1 и №2. Концентрации трийодтиронина, измеренные набором Алкор Био в этих контрольных сыворотках, вполне соответствуют измеренному среднему проценту открытия, полученному с помощью реагентов фирмы Roche.

Достоверно более низкая концентрация тестостерона, измеренная набором фирмы Алкор Био по сравнению с набором Bayer, в контрольной сыворотке №1 (табл. 3), не соответствует высокому проценту открытия, наблюдаемому в этой области значений при исследовании выборки сывороток пациентов (табл. 5). Измеренная набором реагентов фирмы Алкор Био концентрация прогестерона в контроле №1 достоверно ниже, чем при определении набором фирмы Bayer. Подобное несовпадение можно объяснить низкой корреляцией между значениями в данной части выборки. Однако более вероятным объяснением может быть матрикс-эффект контрольных сывороток (см. ниже).

При измерении уровня ХГч в контрольной сыворотке №2 набор реагентов фирмы Алкор Био определяет достоверно бóльшие значения, чем набор фирмы Roche. Эти данные не согласуются с удовлетворительными характеристиками уравнения линейной регрессии, что наводит на мысль о влиянии матрикс-эффекта контролей на результаты анализа в той или иной иммуноферментной системе. Проблему матрикс-эффекта искусственно приготовленных коммерчески доступных контрольных сывороток фирмы Bio-Rad Laboratories мы подробно обсуждали ранее [10-13]. Говоря вкратце, при приготовлении этих контролей, возможно, моделируется смесь реагентов (аналитов), которая не существует в естественно полученной сыворотке крови человека (например, низкое содержание одновременно всех аналитов в контроле №1 и высокое содержание одновременно всех аналитов в контроле №3). Таким образом, контрольные сыворотки могут служить потенциальным источником матрикс-эффекта, обусловливающего отличия в распознавании аналита в контрольных и естественных сыворотках, которые являются объектом исследования. Такое предположение косвенно подтверждается широким разбросом концентраций одного и того же аналита, измеренных в различных лабораториях и, соответственно, разными наборами реагентов [6].

Определение процента сывороток, совпадающих по условному диагнозу при определении в них аналитов наборами разных фирм-производителей, показало, что совпадение условных диагнозов хорошее. Однако при определении тестостерона, ХГч и АФП исследованные образцы крайне неравномерно распределялись по всему исследуемому диапазону значений. Процент сывороток с высокими концентрациями тестостерона составляет 4,4% от общего количества сывороток, поэтому совпадение диагнозов в данном случае нельзя считать полностью корректным, и для получения более точного значения необходимо провести анализ большой группы сывороток с высокими концентрациями тестостерона. Только 7% из всех сывороток, предоставленных ОГИ, и 10% из всех сывороток, предоставленных ЛЭ, содержат нормальные уровни ХГч; 3% из всех сывороток, предоставленных ОГИ, и 4% из всех сывороток, предоставленных ЛЭ содержат нормальные уровни АФП. Таким образом, чтобы подтвердить полученный в данных случаях процент совпадения условных диагнозов, необходимо провести анализ обширной группы сывороток, взятых у мужчин и здоровых небеременных женщин. В случае определения фолликулостимулирующего гормона с помощью наборов реагентов фирм Алкор Био и Roche процент совпадающих по диагнозу сывороток достоверно выше, чем при определении с помощью наборов реагентов фирм Алкор Био и Bayer. В остальных случаях при попарном сравнении наборов реагентов проценты сывороток, совпадающих по условному диагнозу, достоверно не различаются.


Заключение


Сравнив результаты настоящей работы с предыдущими результатами [10], полученными на другой выборке сывороток и с использованием контролей фирмы Bio-Rad Laboratories другого лота, можно утверждать, что:




  • корреляция между значениями, полученными наборами реагентов Алкор Био и трех остальных фирм, достаточно высокая (во всех рассмотренных случаях коэффициент линейной корреляции больше 0,9). Исключение составляют тироксин и трийодтиронин, при определении которых наборами реагентов фирм Алкор Био и Roche наблюдаются низкие коэффициенты корреляции (хотя в данном исследовании они выше полученных в нашей предыдущей работе [10]). Причиной низкой корреляции, скорее всего, является нехватка сывороток с низкими и высокими концентрациями этих аналитов.


  • совпадение условных диагнозов достаточно велико и достоверно не различается в анализируемых парах наборов реагентов.

Таким образом, можно сделать вывод об одинаковой диагностической ценности, информативности и надежности наборов реагентов фирмы Алкор Био и фирм Roche, Bayer Corporation и DPC. В некоторых случаях для получения более достоверных результатов необходимо исследовать обширную выборку сывороток крови с широким диапазоном значений исследуемых аналитов.


Список литературы




  1. Глотов Н. В., Животовский Л. А., Хованов Н. В. и др. Биометрия: Учебное пособие. – Ленинград, 1982.


  2. Инструкции к наборам реагентов Алкор Био.


  3. Инструкции к наборам реагентов для автоматического анализатора ACS:180® (Automated Chemiluminescence System) © Bayer Corporation. All rights reserved.


  4. Инструкции к наборам реагентов для автоматического анализатора Immulite®.


  5. Инструкции к наборам реагентов для автоматического анализатора Roche Cobas® Core.


  6. Инструкция к сывороткам Lyphochek® Immunoassay Plus Control © All rights reserved. Printed in USA.


  7. Лакин Г. Ф. Биометрия. – М., 1990.


  8. Сергиенко В. И., Бондарева И. Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. – М., 2000.


  9. Теория и практика иммуноферментного анализа. / Под ред. А. М. Егорова, А. П. Осипова, Б. Б. Дзантиева и др. – М., 1991.


  10. Урусова М. Е., Головаченко В. А., Гитель Е. П. и др. // Клиническая лабораторная диагностика – 2002. – № 4. – С. 16–22, 35.


  11. Buttner J. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. – 1991. – N 205. – P. 11–20.


  12. Selby C. // Ann. Clin. Biochem. – 1991. – N 36. – P. 704–721.


  13. Wood W.G. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. – 1991. – N 205. – P. 105–112.

Ваш комментарий:
Только зарегистрированные пользователи могут оставлять комментарии. Чтобы оставить комментарий, необходимо авторизоваться.
Вернуться к списку статей